樣本間交叉污染
主要是在采(取)樣的過程中,由于取樣工具之間的交叉造成污染;或者在核酸提取的過程中,由于移液器、離心管等使用不當導致的污染。
PCR試劑的污染
主要是在PCR試劑配制過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。
質粒的污染
在實驗室操作中經常會用到陽性參考品,這些陽性參考品大多數是由某些質粒制作而成,質粒在單位容積內濃度高,不小心使用極易造成污染。
PCR擴增產物污染
這是PCR反應中常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限,所以極微量的PCR產物污染,就可造成假陽性結果。還有一種容易忽視,可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染,在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,據計算一個氣溶膠顆粒可含4.8萬拷貝,因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。







1.進入各工作區域應當按照單一方向進行,即試劑儲存和準備區→標本制備區→擴增區→擴增產物分析區。
2.各區域的設備、清潔用具標記明確,不得混用。

3.各區域的衣服用不同顏色標記,離開各區域時不得將工作服帶出。
4.試驗臺用移動式紫外線燈消毒,高度60-90cm。擴增區延長照射時間,是過夜照射。同時各區域還需安裝懸掛式紫外線燈管。
5.各試驗區盡量避免不必要的走動和進出,減少風險。
6.擴增產物分析區可能會用到某些可致基因突變和有毒物質,應特別注意實驗人員的安全防護。
1、溫濕度
冬季18-24℃,夏季25-28℃,濕度40-70%。
2、空氣過濾及氣流組織要求
新風經熱濕處理及三級(初效+中效+/亞)過濾后送入室內;各房間排風口單獨設置或亞過濾器。
當房間無工藝設備排風時,可通過換氣次數(工藝操作間換氣次數為12~15次/h,緩沖間6~8次/h)計算得出房間送風量,然后根據縫隙法得出房間排風量;當房間有工藝設備(如生物安全柜)排風時,比較設備排風量與滿足換氣次數所需送風量,取兩者之間的較大值(一般情況下,設備排風量較大),然后可根據縫隙法得出房間送風量。根據以上計算風量為設計依據,由此可對新風機組、排風機組及附屬的風管風口進行選型和計算。
氣流組織上,PCR實驗室空調系統通常采用上送下排式的非單向流送風方式。房間上部送風口盡量均勻布置,且與生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點的正上方保持一定距離;房間下部利用室內排風夾道上設置的排風口排風,排風口底部距地面0.1m,排風夾道需設置于室內被污染風險的區域,排風口前面不應有障礙物遮擋。

3、壓力控制
在空調系統各房間送風支管上設置壓力無關型定風量閥,無工藝設備排風房間的排風支管上設置壓力無關型定風量閥,從而恒定房間的風量以控制房間壓力;在有工藝設備排風房間的排風支管上設變風量閥,根據房間內壓差動作,以控制房間壓力。需排風的工藝設備(如生物安全柜)排風支管上設變風量閥,根據設備開啟度調節設備排風量。